很多做研究的老師和同學(xué)，在使用路陽(yáng)的熒光蛋白激發(fā)光源時(shí)候遇到拍照問(wèn)題，明明用熒光蛋白觀察眼鏡能夠清晰看到熒光蛋白的表達(dá)，但很的單反相機(jī)拍不出來(lái)的熒光照片。總覺(jué)得熒光蛋白的拍照濾鏡有問(wèn)題，今天，我們工程師將單反相機(jī)拍熒光照片的基礎(chǔ)知識(shí)給大家普及一下。
因單反相機(jī)是非常智能的相機(jī)，大家使用時(shí)候基本都是調(diào)整到auto檔位，相機(jī)能夠感知環(huán)境光線的明暗，自動(dòng)調(diào)整曝光參數(shù)。拍出來(lái)的照片非常nice。但熒光圖像拍照環(huán)境和常規(guī)照片不一樣，熒光拍照時(shí)候，有強(qiáng)烈的激發(fā)光，需要用熒光拍照濾鏡將激發(fā)光過(guò)濾掉，讓熒光蛋白的熒光成像，有時(shí)候熒光表達(dá)的不是很亮，我們需要調(diào)整單反相機(jī)的ISO、快門(mén)速度和光圈大小。下面將這幾個(gè)參數(shù)給大家做一個(gè)簡(jiǎn)單介紹：
熒光拍照需要的設(shè)備：
激發(fā)光源、拍照濾鏡、單反相機(jī)、三腳架。
安裝轉(zhuǎn)接環(huán)
如果您的單反相機(jī)鏡頭不是67mm，需要一個(gè)轉(zhuǎn)接環(huán)才能安裝到相機(jī)鏡頭上。鏡頭尺寸一般標(biāo)注在鏡頭的zui前面一般標(biāo)注為Φxx mm，如右圖為直徑77mm的鏡頭。先把轉(zhuǎn)接環(huán)旋到鏡頭上，再把濾鏡旋到轉(zhuǎn)接環(huán)上即可。
單反相機(jī)的撥輪：
4. 熒光攝影主撥輪選擇M檔
模式轉(zhuǎn)盤(pán)的檔位介紹：
全自動(dòng)拍攝模式：此模式也叫傻瓜模式，不用設(shè)置任何參數(shù)直接可以拍攝照片。
P檔程度模式：也叫自動(dòng)可調(diào)模式，自動(dòng)檔，快門(mén)、光圈由相機(jī)來(lái)設(shè)定，也可以自己調(diào)節(jié)。
TV快門(mén)優(yōu)先：快門(mén)優(yōu)先多用于拍攝運(yùn)動(dòng)的物體上，特別是在體育運(yùn)動(dòng)拍攝中zui常用。
AV光圈優(yōu)先：光圈優(yōu)先是一種曝光控制模式，適合拍攝人像 微距。
M檔手動(dòng)曝光：手動(dòng)曝光模式，通過(guò)前撥輪設(shè)置快門(mén)速度，背面的快速轉(zhuǎn)盤(pán)設(shè)置光圈大小。
B檔快門(mén)：就是B門(mén)，長(zhǎng)時(shí)間曝光或拍夜景用。即不松手快門(mén)不關(guān)閉。（須用三角架和快門(mén)線，否則影像發(fā)虛）同時(shí)通過(guò)前撥輪或背面的快速轉(zhuǎn)盤(pán)還可調(diào)整光圈參數(shù)。
C檔：用戶(hù)自定義模式。
SCN全自動(dòng)場(chǎng)景模式（人像風(fēng)景夜景等多種拍攝模式）
CA創(chuàng)意自動(dòng)：在此模式下用戶(hù)可以通過(guò)菜單調(diào)整圖像亮度、景深、照片風(fēng)格等功能設(shè)置。
5.光圈：
光圈是一個(gè)用來(lái)控制光線透過(guò)鏡頭，進(jìn)入機(jī)身內(nèi)感光面的光量的裝置，通常在鏡頭內(nèi)。通俗講就是光圈像一個(gè)門(mén)一樣，門(mén)大進(jìn)光多，照片越亮；門(mén)小進(jìn)光少，照片越暗。
表達(dá)光圈大小用F值:
完整的光圈值系列如下： F1， F1.4， F2， F2.8， F4， F5.6， F8， F11， F16， F22， F32， F44， F64
數(shù)值越小，進(jìn)光量越大（光圈越大），數(shù)值越大，進(jìn)光量越小（光圈約?。?/p>
光圈兩大作用：控制進(jìn)光量，控制景深
如何調(diào)整光圈：
佳能單反相機(jī)在M檔的時(shí)候撥動(dòng)付撥盤(pán)可調(diào)整快門(mén)速度，按住AV按鈕并轉(zhuǎn)動(dòng)付撥輪調(diào)整光圈大小。
佳能60D是先按住Q鍵，再轉(zhuǎn)動(dòng)付撥輪
6. ISO調(diào)整：熒光拍攝建議選擇ISO200
ISO：（International Organization for Standardization的縮寫(xiě)）
在膠片時(shí)代，膠片的感光度就是指底片對(duì)于光線的敏感程度，也可以理解為底片對(duì)于光線的反應(yīng)速度。如今的ISO也是指相機(jī)中CMOS圖像感應(yīng)器對(duì)光線的敏感度。ISO對(duì)于成片zui終的清晰度起到至關(guān)重要的作用。在M（Manual Exposure）檔下，能夠控制照片曝光量的就只有光圈、快門(mén)速度與ISO三項(xiàng)數(shù)值。
1. 光圈越大，進(jìn)入相機(jī)的光就越多。光圈越小，進(jìn)入相機(jī)的光就越少。
2. 快門(mén)速度越慢，進(jìn)入相機(jī)的光就越多?？扉T(mén)速度越快，進(jìn)入相機(jī)的光就越少。
3. ISO越低照片越暗，ISO越高照片越亮。ISO越低噪點(diǎn)越少，ISO越高噪點(diǎn)越多。
在保證照片正常曝光的情況下，ISO越低越好。
ISO怎么設(shè)置：
按下ISO檔位，并旋轉(zhuǎn)手柄輪盤(pán)，調(diào)到相應(yīng)ISO
7. 熒光攝影建議設(shè)置的參數(shù)：
選擇M檔：關(guān)閉閃光燈，ISO200,光圈F5.6,快門(mén)1/60
因單反相機(jī)的鏡頭尺寸不一樣，按鍵設(shè)置不同，參數(shù)設(shè)置會(huì)有差異。
建議大家ISO200下，分別調(diào)整光圈和快門(mén)速度，找到一個(gè)理想設(shè)置參數(shù)。
拍GFP熒光照片時(shí)候，有LUV-495A和LUV-520A兩種拍照濾鏡可選，LUV-495A不能隔離葉綠素的熒光。LUV-520A是窄帶濾色片，拍出來(lái)是純綠的圖片，效果對(duì)比如下:大家也可參考《熒光蛋白拍照濾鏡LUV-495A和LUV-520A的區(qū)別》
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