GFP熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用案例
熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用于植物和動物研究實驗室，為廣大動植物研究的科研工作者帶來了諸多的便利，以下為熒光蛋白激發(fā)光源常見應(yīng)用：
1、有時候，研究者們需要對小鼠的伏隔核進行穿孔，以便進一步生化分析。如果能觀測到共轉(zhuǎn)染的熒光，就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就可以用LUYOR-3260RB單熒光蛋白觀測手電筒來觀測熒光，從而找到正確穿孔位置的。研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。他們把這比喻成：從一個大一點的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片，這是很困難的。但是他們用的單熒光蛋白觀測手電筒LUYOR-3430RB，就很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域，從而讓解剖更準(zhǔn)確。
2、用LUYOR-3430RB單熒光蛋白觀測手電筒，可以很快的檢測樣本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記）成功。
3、用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選，在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了高效同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個突變株,得到雙交換突變株的效率為25％ -62.5％,從雙交換突變株得到無痕缺失突變株的效率為100％.通過gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用LUYOR-3430RB GFP激發(fā)光源和LUV-30A熒光觀測眼鏡,可以對平板上的基因缺失株直接進行快速判定。
熒光蛋白激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時，用LUV-30A黃色濾光鏡觀測，可檢測含綠色熒光蛋白（GFP）的生物；激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時，用LUV-50A紅色濾光鏡觀測，可檢測含紅色熒光蛋白（DsRed）的生物。更多熒光蛋白激發(fā)光源用于檢測、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（DsRed）基因的植物、動物及微生物，如水稻、玉米、斑馬魚、小鼠、細：菌、真菌等等，請咨詢上海峰志儀器有限公司。
RFP熒光蛋白在老鼠上的表達
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)美國nightsea、美國路陽生產(chǎn)的熒光蛋白激發(fā)光源、GFP激發(fā)光源、熒光蛋白激發(fā)觀測燈、熒光蛋白體視顯微鏡熒光適配器、熒光蛋白觀測眼鏡，請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系網(wǎng)頁底部.
GFP激發(fā)光源在細胞生物學(xué)的應(yīng)用
GFP激發(fā)光源在細胞生物學(xué)的應(yīng)用具有易于檢測、熒光穩(wěn)定、廣譜性、易于載體構(gòu)建、無毒害諸多優(yōu)點，因為在生物學(xué)應(yīng)用廣泛，上海峰志儀器有限公司銷售的GFP激發(fā)光源為你簡單整理10個應(yīng)用：
1、對細胞生理過程監(jiān)控
通過基因操作，蛋白與不同GFP進行融合，形成融合蛋白。通過融合蛋白在激發(fā)光源的照射下發(fā)出熒光特制，可以對相應(yīng)蛋白的表達和轉(zhuǎn)運以及生理反應(yīng)進行監(jiān)控。監(jiān)控主要有：轉(zhuǎn)移和定位、GFP光譜的生化修飾、熒光共振的能量轉(zhuǎn)移。
2、細胞篩選
基于GFP能夠吸收并在激發(fā)光源照射下發(fā)出熒光，并且熒光穩(wěn)定以及檢測方法快速、方便的特性，GFP在細胞篩選上廣泛應(yīng)用。如：應(yīng)用流失細胞計數(shù)儀來篩選蛋白產(chǎn)量增強的細胞；使用GFP作為標(biāo)記快速篩選出在生長抑制環(huán)境下仍能保持重組蛋白大量表達的CHO細胞；通過GFP熒光的減少，可以檢測出鼠和人細胞的凋亡；利用GFP融合細胞作為細胞表面活體熒光標(biāo)記，通過篩選已經(jīng)獲得GFP表達的E.coli、人體腎細胞和猿猴COS-1細胞燈特殊類型。
3、細胞亞結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)分子的定位
相對于以前使用細胞分級分離和免疫細胞化學(xué)技術(shù)研究蛋白質(zhì)移位，現(xiàn)在使用GFP融合蛋白顯像技術(shù)更簡便且可靠，既能更快又能更全面的對蛋白質(zhì)的移動進行研究。如：對幾個GFP突變體的檢定，通過激發(fā)光源激發(fā)不同熒光，從而在活細胞中準(zhǔn)備的區(qū)分多種不同熒光融合蛋白并了解他們的分布情況。
4、用于細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的動力學(xué)研究
研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)主要有：光漂白熒光恢復(fù)法（FRAP）、光漂白熒光損失法(FLIP)。FRAP主要是通過對細胞內(nèi)特定的點或區(qū)域進行強烈的光照，使熒光發(fā)生光跑白作用，再通過相同時間間隔的光影像采樣記錄下熒光恢復(fù)的動力學(xué)過程。FLIP是對細胞的一個區(qū)域進行持續(xù)性的光漂白，再對光漂白區(qū)外的熒光的損失進行監(jiān)控就可獲得一些標(biāo)記蛋白之間的相關(guān)性信息。另外一種可以用來研究細胞內(nèi)返傭動力學(xué)的方法就是熒光相關(guān)性分光光鏡檢查。
5、計算細胞生長速度
在高水平組合型表達GFP的細胞品系中，在細胞生長的對數(shù)期。綠色熒光蛋白激發(fā)后所發(fā)出的熒光信號與細胞的數(shù)量密切相關(guān)。測量到的任何熒光強度都可以相應(yīng)地轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎麧舛取１M管在細胞生長的后期，用熒光信號計算得到的細胞數(shù)目略低于培養(yǎng)物種的實際數(shù)目。但在常用的臺盼藍技術(shù)方法中，這些誤差是允許的。利用這一技術(shù)，可以測定某些細胞的分布和生長狀況，尤其是一些透明的動植物組織內(nèi)特定細胞、化合物的生長、分布情況。也有人用此項技術(shù)進行病毒在植物體內(nèi)的生長、擴散情況的研究，取得了不錯的效果。
6、觀察細胞內(nèi)酶的活動
GFP不僅可以用來探測融合蛋白的空間定位，而且可以對活細胞的酶活動，如：磷酸化作用、蛋白水解作用燈進行報告，還可測量與酶活動相關(guān)的細胞內(nèi)的pH、cAMP、Ca2+濃度。通過將外源系列插曲GFP基因中，可以對細胞內(nèi)酶的活動進行觀察以及了解這些酶的生理學(xué)參數(shù)。插入外源基因后所表達的融合蛋白中的GFP蛋白發(fā)色基團會發(fā)生構(gòu)像改變，其發(fā)射的熒光的強度發(fā)生很大的變化。這些指示劑可以用來檢測細胞內(nèi)許多酶的作用。例如：蛋白水解酶、激酶、氧化還原酶以及一些小配基的濃度。
7、用于細胞示蹤實驗研究
利用GFP的激發(fā)后發(fā)出熒光可以清楚地對腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移進行追蹤。體內(nèi)腫瘤侵襲的研究要求在周圍正常細胞背景下，能識別少量甚至是單個的瘤細胞。
8、基因表達調(diào)控
GFP作為一種活體報告蛋白，用于研究基因表達的調(diào)控，易于會提觀測和檢測。
9、定量分析
GFP的熒光強度很高，很容易用一起定量檢測，而且研究表明GFP的熒光強度與其相連的細胞或蛋白有一定的相關(guān)性，只需要作出一條相關(guān)性曲線，就可以對研究隊形進行定量的分析。
10、DFP報告蛋白用于細胞活體分離與純化
利用細胞表面標(biāo)記，通過流體細胞分光光度計或熒光活化細胞篩選儀可以分離與純化特殊類型細胞，對分析cDNA文庫、研究基因的細胞發(fā)育或組織專一性表達十分重要。利用GFP融合蛋白為細胞表面活體熒光標(biāo)記，通過篩選已經(jīng)獲得GFP的表達的大腸桿菌、人體腎細胞和猿猴COS-1細胞特殊類型。
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)各種熒光蛋白激發(fā)光源（GFP、eGFP、BFP、CFP、YFP、RFP、Dsred、Mcherry），能夠觀測綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、紅色熒光蛋白等在種子、愈傷組織、葉片等上的表達，便攜式GFP激發(fā)光源能夠在實驗室、溫室大棚、試驗田等地方直接觀測熒光蛋白的表達，請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系：138-1868-3556，聯(lián)系人：張小姐。
熒光蛋白GFP的應(yīng)用
熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下，人眼能明顯的看到熒光，而一起被廣泛應(yīng)用于各種生物研究，主要特性如下
1、易于檢測
GFP熒光反應(yīng)不需外加任何反應(yīng)底物，酶或其他共反應(yīng)銀子，也就不存在這些物質(zhì)可能難于進入細胞的問題，只需紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)，即可發(fā)出綠色熒光，GFP發(fā)射的熒光用LUV-30A熒光觀測眼鏡或用熒光顯微鏡就可以檢測到。靈敏度高，對于單細胞水平的表達也可識別，同時還可利用其進行定量檢測。由于GFP對活細胞基本無毒害，因此無需特殊處理就可以很方便進行活體觀察。而且，具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得，使在同一細胞中同時分析兩種不同蛋白或啟動子成為可能，可以用于法語細胞學(xué)、藥物篩選、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速、簡便、經(jīng)濟的標(biāo)記蛋白，GFP基因作為報道基因有很廣泛的應(yīng)用。
2、熒光穩(wěn)定
GFP無光漂白現(xiàn)象，在很大PH范圍內(nèi)（PH7-12）都可以正常發(fā)出熒光，手溫度的影響也很小，只有在超過65℃時才會變性，即熒光消失。熒光顯微鏡強光照射下，GFP抗光漂白能力比熒光素強，特別是在450~490nm藍光波長下更穩(wěn)定，單在340-390nm或395-440nm范圍內(nèi)，仍會發(fā)生光漂白現(xiàn)象。對于長時間光照，GFP也有很好的耐受性，根據(jù)Sheen等的研究，GFP在受體內(nèi)表達時可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。
3、廣譜性
首先表現(xiàn)在它的表達幾乎不受種屬范圍的限制，在微生物、植物、動物中都獲得了成功的表達；其次就是沒有細胞種類和位置的限制，在各個部位都可以表達，在紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見的熒光。
4、易于載體構(gòu)建
由于GFP較小，只含有238個氨基酸，編碼GFP的基因序列也比較短，約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構(gòu)建多種質(zhì)粒，而不至于使質(zhì)粒過大影響轉(zhuǎn)化頻率。盡管野生型的GFP在某些植物和動物中表達很弱，但是可以通過更換GFP生色團氨基酸改變堿基組分、出去內(nèi)含子、更換強啟動子燈方法加強表達。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體，在大腸桿菌中表達時，紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強度比野生型高約100倍。
5、無毒害
Chalfie等的研究表明：GFP對生活細胞基本無毒害，Sheen等的研究進一步表明：在玉米中，即便GFP在細胞中的表達量很高時，對細胞也不會產(chǎn)生明顯毒害，但是至今我們還不了解它對植物再生能力的影響。
添加微信咨詢！