紫外交聯(lián)儀的在northern實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用

作者：美國路陽時(shí)間：2022-10-17 21:36:48瀏覽980 次

信息摘要：

美國路陽UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀在Northern blotting、Southern blotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯(lián)、Sterilization（滅菌）、DNA Nicking（DNA缺失）的應(yīng)用。

1.Membrane Blotting

美國路陽儀器設(shè)備有限公司UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀可用于Northern、Southern blotting、EMSA等膜交聯(lián)，當(dāng)使用254 nm波長(zhǎng)、能量為120.0mJ/cm2交聯(lián)時(shí)，尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶（或RNA的尿嘧啶）之間形成共價(jià)鍵穩(wěn)定。

（1）將一張或兩張用轉(zhuǎn)移緩沖液（如10×SSC）輕輕潤濕的吸水紙放在UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀的紫外輻照室。將尼龍膜放在吸水紙上，使附著核酸的一面朝上，使紫外線燈管能夠直接照射核酸。

（2）關(guān)閉UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀的門。

（3）按下STAR（運(yùn)行）按鍵啟動(dòng)，當(dāng)紫外線燈管亮?xí)r，顯示屏將立即開始從輸入值開始累計(jì)。如果在曝光期間的任何點(diǎn)打開門，照射將停止，并顯示已曝光值。（關(guān)上門按STAR按鍵繼續(xù)照射。）

（4）輻照完成后，蜂鳴器將鳴響約3–4秒。自動(dòng)交聯(lián)大約需要25–50秒。

（5）取下尼龍膜并關(guān)上門，交聯(lián)完成。每次使用后，清潔紫外線交儀紫外輻照室，以清除殘留的鹽。

2.DNA Nicking

美國路陽儀器設(shè)備有限公司UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀也可用于切割溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠中的DNA，代替HCl洗滌液，瓊脂糖凝膠中比較大的DNA（>20kb）的轉(zhuǎn)模效率很低，因此DNA在轉(zhuǎn)移到尼龍膜之前需要進(jìn)行前處理。DNA可通過HCl或紫外線照射進(jìn)行切割。HCl脫嘌呤反應(yīng)較難控制，且對(duì)溫度極為敏感。所以在轉(zhuǎn)移前，在短波長(zhǎng)紫外光（254 nm）中80.0mJ/cm2切割DNA的方法更可靠。

3.Sterilization（滅菌）

紫外線shajun就是通過紫外線照射，破壞及改變微生物的DNA（脫氧核糖核酸）結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌當(dāng)即死亡或不能繁殖，達(dá)到shajun的目的。真正具有shajun作用的是UVC紫外線，因?yàn)镃波段紫外線很容易被生物體的DNA吸收，尤其是254nm波長(zhǎng)左右紫外線佳。紫外線shajun屬于純物理方法，具有簡(jiǎn)單便捷、光譜高效、無二次污染。因此在短波長(zhǎng)紫外光（254 nm）中滅菌95sec。

4.RecA Screening（RecA篩選）

UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀也可用于篩選RecA突變體，在短波長(zhǎng)紫外光（254 nm）中40.0mJ/cm2照射下，recA突變體阻止了紫外線誘導(dǎo)損傷的修復(fù)，阻止了紫外照射過的過的recA細(xì)胞的生長(zhǎng)。