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紫外交聯(lián)儀的在northern實驗的應(yīng)用

作者:美國路陽 時間:2022-10-17 21:36:48瀏覽1159 次

信息摘要:

美國路陽UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀在Northern blotting、Southern blotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯(lián)、Sterilization(滅菌)、DNA Nicking(DNA缺失)的應(yīng)用。

美國路陽UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀在Northern blotting、Southern blotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯(lián)、Sterilization(滅菌)、DNA Nicking(DNA缺失)的應(yīng)用。

northern-blotting-diagram.jpg

1.Membrane Blotting

美國路陽儀器設(shè)備有限公司UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀可用于Northern、Southern blotting、EMSA等膜交聯(lián),當使用254 nm波長、能量為120.0mJ/cm2交聯(lián)時,尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價鍵穩(wěn)定。

(1)將一張或兩張用轉(zhuǎn)移緩沖液(如10×SSC)輕輕潤濕的吸水紙放在UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀的紫外輻照室。將尼龍膜放在吸水紙上,使附著核酸的一面朝上,使紫外線燈管能夠直接照射核酸。

(2)關(guān)閉UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀的門。

(3)按下STAR(運行)按鍵啟動,當紫外線燈管亮時,顯示屏將立即開始從輸入值開始累計。如果在曝光期間的任何點打開門,照射將停止,并顯示已曝光值。(關(guān)上門按STAR按鍵繼續(xù)照射。)

(4)輻照完成后,蜂鳴器將鳴響約3–4秒。自動交聯(lián)大約需要25–50秒。

(5)取下尼龍膜并關(guān)上門,交聯(lián)完成。每次使用后,清潔紫外線交儀紫外輻照室,以清除殘留的鹽。

3200-blacks.jpg

2.DNA Nicking

美國路陽儀器設(shè)備有限公司UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀也可用于切割溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠中的DNA,代替HCl洗滌液,瓊脂糖凝膠中比較大的DNA(>20kb)的轉(zhuǎn)模效率很低,因此DNA在轉(zhuǎn)移到尼龍膜之前需要進行前處理。DNA可通過HCl或紫外線照射進行切割。HCl脫嘌呤反應(yīng)較難控制,且對溫度極為敏感。所以在轉(zhuǎn)移前,在短波長紫外光(254 nm)中80.0mJ/cm2切割DNA的方法更可靠。

3.Sterilization(滅菌)

紫外線shajun就是通過紫外線照射,破壞及改變微生物的DNA(脫氧核糖核酸)結(jié)構(gòu),使細菌當即死亡或不能繁殖,達到shajun的目的。真正具有shajun作用的是UVC紫外線,因為C波段紫外線很容易被生物體的DNA吸收,尤其是254nm波長左右紫外線佳。紫外線shajun屬于純物理方法,具有簡單便捷、光譜高效、無二次污染。因此在短波長紫外光(254 nm)中滅菌95sec。

4.RecA Screening(RecA篩選)

UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀也可用于篩選RecA突變體,在短波長紫外光(254 nm)中40.0mJ/cm2照射下,recA突變體阻止了紫外線誘導(dǎo)損傷的修復(fù),阻止了紫外照射過的過的recA細胞的生長。

DNA短波紫外交聯(lián)儀UCL-3200